POC(Point-of-Care)又稱即時檢測,是IVD行業(yè)的一個細分領域,指在采樣現(xiàn)場進行的、利用便攜式分析儀器及配套試劑快速得到檢測結(jié)果的一種檢測方式。
POCT技術最早始于20世紀中期,由Edmonds以干化學制片測量血糖及尿糖,隨后由Ames公司將其檢測項目擴大并商業(yè)化。由于方法簡便快速而得到普遍應用。近20年來,POC檢測的發(fā)展在全球范圍內(nèi)是肉眼可見的速度在突飛猛進。
中國自2015年POCT第一股上市開始,以每年超過20%的速度快速增長,預計2027年整體市場超過260億元,遠超全球POCT行業(yè)7.4%的發(fā)展速度,已經(jīng)是我國IVD行業(yè)增長最快的細分領域之一。
來源:前瞻產(chǎn)業(yè)研究院
為了更好的理解POC檢測,為其技術的發(fā)展指明方向,已有幾個標準來評估POC檢測的適用性。其中包括WHO的ASSURED標準,FDA的CLIA標準,以及在新冠之后提出的STARLITE標準。
在新冠疫情期間,POCT通過實際場景的應用自證了其技術的成熟性和可靠性,尤其是分子POCT檢測技術的廣泛運用。 等溫擴增(如HCA、MDA、NASBA和LAMP等)在分子POC診斷中發(fā)揮了越來越重要的作用。等溫擴增具有與qPCR相似的靈敏度和特異性,但是在快速、低成本和便攜性方面具有優(yōu)勢,因此成為在資源有限環(huán)境下使用POC檢測的理想選擇。 近幾年來,等溫擴增技術的進步,尤其是在實時檢測、多重擴增和基于芯片的檢測方面的發(fā)展,提高了等溫擴增的靈敏度和準確性,可以說是徹底改變了POC行業(yè),為更快、更方便的診斷鋪平了道路。 在多種等溫擴增技術中,LAMP是最常用的方法,它可實現(xiàn)在恒定溫度(60-65oC)下對DNA或RNA靶標進行高效、特異和快速擴增。在相同時間內(nèi),LAMP擴增 效率比傳統(tǒng) PCR高100倍。不過,LAMP技術也有一些限制,例如具有較高假陽性率,引物設計復雜、重復性不太好。 另一種等溫擴增技術,基于核酸序列的擴增(Nucleic?。幔悖椋洹。螅澹瘢酰澹睿悖濉。猓幔螅澹洹。幔恚穑欤椋妫椋悖幔簦椋铮?,NASBA)也越來越受歡迎,它的核心優(yōu)勢是能在更低的溫度下(~41°C)下直接擴增RNA,只需要使用2個特異性引物P1/2,因此在引物設計方面就沒那么復雜,更容易優(yōu)化。 與使用Bst酶鏈置換活性的LAMP擴增不同,NASBA擴增是依賴AMV逆轉(zhuǎn)錄酶、RNase?。群褪删wT7?。遥危辆酆厦富钚赃M行的反應。 其兩個特異性引物與目標RNA序列雜交,并通過逆轉(zhuǎn)錄酶生成DNA的互補鏈(cDNA),然后將其作為模板合成多個RNA副本。新的RNA鏈和cDNA模板通過變性和再變性分離并重新連接。這一過程在反轉(zhuǎn)錄(產(chǎn)生更多的cDNA)、RNA合成和指數(shù)級RNA擴增的循環(huán)中重復進行,可在90分鐘內(nèi)將目標片段擴增1012倍以上。 NASBA反應的反轉(zhuǎn)錄過程被直接合并到擴增反應中,因此該技術最適合分析RNA樣品。樣品中DNA、肝素、檸檬酸鹽、血紅蛋白、白蛋白和脂質(zhì)等的污染將不會對結(jié)果造成影響,因而適用于可能不適合其他試驗檢測的樣品。且反應溫度較低,因此是細菌、病毒等多種病原微生物POC診斷的理想選擇。
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