1 檢測的基本方法
目前血凝儀大多采用生物學方法,可分成三類:電流法、粘度法、光學法。
1.1 電流法:該法是利用血漿標本纖維蛋白具有的導電性,將電極插入標本中,利用兩電極之間的電流的通、斷來判斷纖維蛋白是否形成,依此確定凝固終點。
1.2 粘度法:又稱磁珠法,儀器的檢測部分有獨立的線圈產(chǎn)生所需的電磁場,檢測時在待測標本中加入小磁珠,利用變化的磁場使小磁珠產(chǎn)生運動,隨著血漿的凝固,血漿的粘稠度征集增加,小磁珠擺幅逐漸減少,儀器內(nèi)的電磁傳感器,測定小磁珠的不同震蕩幅度,計算出血漿的凝固時間。
1.3 光學法:該法是目前血凝儀使用最多的一種檢測方法。當血漿在樣品杯中逐漸凝固時,纖維蛋白原轉(zhuǎn)變成纖維蛋白,其理學性狀也隨著變化;當一束光通過樣品杯時,其透射光和散光的強度也會隨之變化。
2 檢測的基本原理
比濁法以血漿中的被檢測物質(zhì)作為抗原,抗原與試劑中的抗體混合時會發(fā)生特異性結(jié)合反應,產(chǎn)生復合物顆粒,依此來測定被檢測物質(zhì)含量。
其原理是:抗原量同抗體特異性結(jié)合反應達到某一程度與所需的時間之間存在一定的數(shù)量關(guān)系,在檢測過程中,隨著待檢物質(zhì)與相應抗體結(jié)合,其復合物顆粒增多單色光通過時,透過的或反射的光強度就會發(fā)生一定的變化,儀器的電路部分自動算出單位時間內(nèi)吸光度的變化量,再根據(jù)標準曲線推算出待檢
物質(zhì)的含量。
使用光學法檢測時,一般是將預溫好的血漿標本和試劑快速混合,在混合瞬間吸光度非常弱,隨著樣品和試劑混合物中的纖維蛋白凝塊的形成,反應杯內(nèi)標本吸光度逐漸增強,當標本凝固完全后,吸光度值就穩(wěn)定下來;儀器在血漿和試劑混合的瞬間,也就是吸光度最弱時.
設定吸光度值A=0%,在血漿和樣品凝固完全后,吸光度最強時,設定吸光度值A=100%;在0%-100%吸光度變化之間,儀器檢測通道單位時間內(nèi)分別采集多個數(shù)據(jù),這樣吸光度的變化值可做出一條曲線。
儀器根據(jù)實驗項目需要自動選取曲線上的一個點所對應的時間為凝血時間;儀器內(nèi)的計算電路對做出的曲線求二次微分,二次微分為零的點,就是凝固終點;因為凝血是一個酶促的加速過程,到凝固終點時,反應速度和加速度都達到最大,此時凝固曲線的二次微分為零。
儀器在測定待測血漿樣品前,必須首先定標,也是對已知濃度或活性的標準品的凝血時間宋制定標準曲線;在檢測待測樣品時,計算電路首先檢測出血漿的凝固時間,在根據(jù)凝固時間從標準曲線上求出濃度或活性。
3 儀器的檢測項目和臨床應用
儀器的檢測項目一般都有十幾種,用戶可根據(jù)臨床需要和試劑情況選擇檢測項目。
其中:凝血實驗主要是針對人體內(nèi)抗酶系統(tǒng)和纖溶系統(tǒng)中的酶、酶原和一些因子的測定,常檢項目有:(1)TT-凝血酶時間;(2)PT-凝血酶原時間;(3)APPF-部分凝血活酶時間;(4)FIB-纖維蛋白。
除此,還可測定下列參數(shù):(1)凝血因子分析(Ⅱ、Ⅴ、Ⅹ、Ⅷ、Ⅸ、Ⅺ、Ⅻ);(2)α-2-抗胞漿素;(3)肝素抗-Xa;(4)蛋白C及活性蛋白C;(5)狼瘡抗凝物;(6)蛋白C和S抗凝物等等。
當病人發(fā)生DIC、原發(fā)性纖溶癥、維生素K缺乏癥、肝臟疾病或血液循環(huán)中有抗凝物質(zhì)時,凝血酶原時間(PT)都會延長;若PT縮短則常見于凝血因子V增多癥、高凝狀態(tài)和血栓性疾病等。
當病人有肝臟疾病、阻塞性黃疸、新生兒出血癥、腸道滅菌綜合征、吸收不良綜合征等某種疾病時,活化部分凝血酶時間(APTT)會延長;APTT參數(shù)是反映血漿中凝血因子Ⅷ、Ⅸ、Ⅺ、Ⅻ水平的實驗,是外源性凝血系統(tǒng)的篩選實驗;
當血漿中這幾種因子某種減少時,APTT參數(shù)也延長,可進一步檢查凝血因子,若Ⅷ因子缺乏可能是甲型血友病、Ⅸ因子缺乏一般是乙型血友病。而APIT減少,一般是血栓性病癥,如心肌或肺梗死、腦血管病變等或是促凝物質(zhì)進入血液及凝血因子活性增高。
當纖維蛋白原濃度(FIB)大于4.5g/L時:
常見于糖尿病酸中毒、尿毒癥、急性腎炎、休克、急性感染和惡性腫瘤及外科大手術(shù)等。
FIB參數(shù)小于1.7g/L時:
多見于彌漫性血管內(nèi)凝血和原發(fā)性纖溶癥、重癥肝炎和肝硬化等;FIB參數(shù)也用一起監(jiān)測防檢和溶栓治療。
總之,在醫(yī)學各科對疾病的研究、診斷和治療方面,凝血分析的各個參數(shù)均有其不同的重要意義。
(文章來源于互聯(lián)網(wǎng))