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ＰＣＲ技術(shù)類似于ＤＮＡ的天然復(fù)制過程，其特異性依賴于與靶序列兩端互補(bǔ)的寡核苷酸引物。ＰＣＲ由變性一退火—延伸三個(gè)基本反應(yīng)步驟構(gòu)成。這個(gè)反應(yīng)過程在ＰＣＲ反應(yīng)容器中進(jìn)行，隨著基因擴(kuò)增儀的不斷發(fā)展，其反應(yīng)容器也經(jīng)歷了從１．５ｍｌ到０．２ｍｌ （０．２５ｍ１）的離心管逐步發(fā)展成ＰＣＲ專用的薄壁的０．２ｍｌ，０．１ｍｌｐｃｒ管。隨著ｐｃｒ擴(kuò)增反應(yīng)數(shù)量的提高，逐步形成了ＰＣＲ條、ＰＣＲ板高通量的基因擴(kuò)增容器。
ＰＣＲ由變性－－退火－－延伸三個(gè)基本反應(yīng)步驟構(gòu)成
模板ＤＮＡ的變性：
模板ＤＮＡ經(jīng)加熱至９４℃左右一定時(shí)間后，使模板ＤＮＡ雙鏈或經(jīng)ＰＣＲ擴(kuò)增形成的雙鏈ＤＮＡ解離，以便它與引物結(jié)合，為下輪反應(yīng)做準(zhǔn)備。
模板ＤＮＡ與引物的退火（復(fù)性）：
模板ＤＮＡ經(jīng)加熱變性成單鏈后，溫度降至５５℃左右后，引物與模板ＤＮＡ單鏈的互補(bǔ)序列配對結(jié)合。
引物的延伸：
ＤＮＡ模板——引物結(jié)合物在Ｔａｑ的作用下，以ｄＮＴＰ為反應(yīng)原料，按堿基配對與半保留復(fù)制原理，合成一條新的與模板ＤＮＡ 鏈互補(bǔ)的半保留復(fù)制鏈。
ＰＣＲ技術(shù)的基本原理
該技術(shù)是在模板ＤＮＡ、引物和四種脫氧核糖核苷酸存在下，依賴于ＤＮＡ聚合酶的酶促合成反應(yīng)。
ＤＮＡ聚合酶以單鏈ＤＮＡ為模板，借助一小段雙鏈ＤＮＡ來啟動(dòng)合成，通過一個(gè)或兩個(gè)人工合成的寡核苷酸引物與單鏈ＤＮＡ模板中的一段互補(bǔ)序列結(jié)合，形成部分雙鏈。
在適宜的溫度和環(huán)境下，ＤＮＡ聚合酶將脫氧單核苷酸加到引物３′－ＯＨ末端，并以此為起始點(diǎn)，沿模板５′→３′方向延伸，合成一條新的ＤＮＡ互補(bǔ)鏈。
（文章來源于互聯(lián)網(wǎng)）
