PCR技術(shù)的基本原理
該技術(shù)是在模板DNA、引物和四種脫氧核糖核苷酸存在下,依賴于DNA聚合酶的酶促合成反應。
DNA聚合酶以單鏈DNA為模板,借助一小段雙鏈DNA來啟動合成,通過一個或兩個人工合成的寡核苷酸引物與單鏈DNA模板中的一段互補序列結(jié)合,形成部分雙鏈。
在適宜的溫度和環(huán)境下,DNA聚合酶將脫氧單核苷酸加到引物3′-OH末端,并以此為起始點,沿模板5′→3′方向延伸,合成一條新的DNA互補鏈。
如何選擇PCR管
1、材質(zhì):PCR 耗材一般都是 PP 材質(zhì),因為 PCR/qPCR 耗材通常會與試劑或樣品直接接觸,表面不易于粘附生物分子,有良好的化學耐性及溫度耐受性。
2、PCR 管/板體積:依據(jù)具體的實驗要求選用合適的產(chǎn)品。單管和聯(lián)管是兩種最常用的形式。
3、管蓋選擇:單管和連管都有平蓋和凸蓋之分,而平蓋和凸蓋各有優(yōu)點。平蓋適用于熒光定量PCR。
4、管壁厚度:管壁厚度會直接影響熱傳導率,極薄的壁厚可優(yōu)化熱傳遞減少循環(huán)時間。進一步減少了熱障,從而帶來更快,更穩(wěn)健的反應。
5、顏色:PCR板通常可提供多種不同的顏色形式,透明的 PCR 管更有助于進行樣品分類管理。白色 PCR 產(chǎn)品可最大程度地反射熒光信號,減少孔間信號交叉污染,可優(yōu)化實時熒光定量 PCR 的結(jié)果。不同品牌儀器,由于熒光檢測器位置設計不同,請參考生產(chǎn)廠家推薦的耗材。
(文章來源于互聯(lián)網(wǎng))